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REFERENCE: Modified from Maloy, S., V. Stewart, and R. Taylor. 1996. Genetic analysis of pathogenic bacteria. Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY.

PCR(polymer chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing, extension의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소..

출처 : http://bioinfo.sarang.net/wiki/PrimerDesign PrimerDesign Primer Design. PCR을 통해 특정서열을 증폭해내고자 할때, 원하는 서열을 콕 집어내려면, 서열을 보고 적절한 primer를 디자인해야한다. 약 18-24mer의 oligomer서열과 Tm값을 계산해낼 수 있다. annealing온도의 몇도차이가, 현저한 PCR결과를 만들어낸다. 20base이내..

Ligation 후 Transformation하기 1. Beed와 selective plate를 37℃에 incuvation. - ligation 되기를 기다리는 동안 냉장보관 해 둔 plate에 veed를 20~25개 정도 넣어서 37℃ incuvator에 미리 데워둔다. - selective plate : 우리가 사용하고자 하는 vector가 가진 restriction gene이 배양시 발현 될 것이기에, 이 항생제가 포함된 배지를 이..

Ligation Kit을 이용한 DNA Ligation 실제 우리 실험실에서는 빠른 시간내에 DNA ligation을 하기위해서 DNA ligation kit을 이용한다. * KIT 조성 (TaKaRa) ┏ solutionⅠ : 효소액 ┣ solutionⅡ : 연결 완충 용액 ┗ solutionⅢ : Transformation Enhancer ⇒ circular DNA를 생성하는 ligation 반응 후에 competent cell 내부로의 transformation 전에 li..